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测定食物中氨基酸含量一般采用氨基酸分析仪，柱后衍生测定。但氨基酸分析仪价格昂贵，分析时间长，且只能用于分析氨基酸，限制了氨基酸分析技术的广泛应用。七十年代以来，柱前衍生高效液相色谱法开始应用于氨基酸的测定。液相色谱通用性强，检测灵敏度高,可用于多种物质的分析。

济南鲁瑞科学仪器有限公司所采用柱前衍生紫外检测的方法对几种食物中的16种氨基酸进行了测定。

方法

1、试剂

浓盐酸（优级纯），（分析纯），混合氨基酸标准液，含17种蛋白水解氨基酸，天冬氨酸、、、、、、、、、、、撷氨酸、蛋氨酸、赖氨酸、异、、苯，除浓度为1.25mmol/L外，其余16种氨基酸浓度各为2.5mmol/L流动相A,磷酸盐缓冲液用1：10双蒸水稀释，pH4.95。亦可自行配制，流动相B：乙睛，流动相C：双蒸水,硼酸盐缓冲液衍生试剂6一氨基喹琳基一N一羟基琥珀酞亚氨基甲酸酯，用时加入1mL乙睛,混匀于55℃烘箱加热10min至溶解。

2、仪器
高效液相色谱仪

紫外检测器

真空泵

涡旋混合器

3、色谱条件色谱柱

色谱柱：高效C18色谱柱

柱温：37℃

检测波长：248nm
进样量：10uL

梯度洗脱条件

4、实验方法

4.1衍生反应

衍生试剂（AQC）与氨基酸迅速反应生成在248nm有紫外吸收的高稳定性的脲和羟基琥珀酰亚胺（NHS），过量的试剂可在慢反应中水解，过程如下

4.2氨基酸衍生步骤
用微量注射器移取10uL稀释的氨基酸标准液或样品水解液放人6 (50mm样品
管底部加人70uL硼酸盐缓冲液,涡旋混合10s)，边涡旋混合边加入20uL衍生试剂溶液，用封口膜密封样品管,置于55℃烘箱中加热10min，从烘箱中取出样品管冷却至室温,供分析用。此衍生样品于4℃保存两周。

4.3样品水解
精密称取适量样品约0.5-1.0g于水解管中,加入6mol/L盐酸10-15ml，加入少量新蒸馏的，抽真空，充高纯氮气，重复3次。迅速将已充好氮气的水解管拧紧盖子，放入110℃烘箱中水解22h。水解完毕，将水解液过滤，定容。取适量，于55℃减压干燥至干，再用适量二次蒸馏水复溶，备用。
工作曲线制作将氨基酸标准液配制成浓度分100,200,400,600,800,1000umol/L的溶液，每一标准液取10uL依上法衍生后进行测定。

4.4结果与讨论
回归方程根据工作曲线，以峰面积（A）与浓度（C）进行回归分析，回归方程结果见表2。各氨基酸的检测限为0.54umol/L

结果：

优化了衍生试剂用量、衍生时间、缓冲盐浓度以及pH值和柱温等影响因素，最终在40 min内实现了18种氨基酸的分离。

结论：该方法操作简便、灵敏度高、准确度和精密度好，可用于注射液中氨基酸的含量测定。